Cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) é uma técnica analítica amplamente utilizada em diversas áreas, como pesquisa, indústrias e centros tecnológicos, para separação, identificação e quantificação de compostos em uma mistura. Isto você já sabe e pode acompanhar mais em Cromatografia, Agora vou trazer aqui um problema muito comum em desenvolvimento analítico, o Dewetting de colunas cromatográficas. Este artigo vai explorar os conceitos, as causas, as consequências e vou lhe mostrar métodos de mitigação deste problema.
O que é o Dewetting em colunas cromatográficas?
Dewetting refere-se á formação de bolhas de ar ou zonas secas dentro da coluna cromatográfica, onde a fase móvel não fica em contato por completo com a fase estacionária. Esse fenômeno consiste quando a fase estacionária, que é tipicamente um material de sílica revestido com uma camada de melhor afinidade ligada, perde seu filme de líquido devido as mudanças nas condições operacionais ou até mesmo incompatibilidades entre a fase móvel e o revestimento interno da coluna cromatográfica.
Quais são as causas de ocorrer um Dewetting em colunas cromatográficas?
Dewetting pode ser causado por diversos fatores, então vou citar os mais importantes:
Mudanças de polaridade do solvente da fase móvel: Alterações bruscas de polaridade do solvente da fase móvel podem causar o deslocamento do filme de solvente na fase estacionária. O exemplo mais comum é a transição de solventes altamente polar para um solvente menos polar, que pode resultar na formação de bolhas. Cuidado com as misturas de solventes da fase móvel;
Fluxo da fase móvel inadequado: Muito cuidado com as interrupções ou as variações bruscas no fluxo da fase móvel. As paradas repentinas na bomba do equipamento HPLC podem criar vácuos e induzir a formação de bolhas;
Contaminação ou obstrução dos poros da coluna cromatográfica: A contaminação dos solventes ou a falta de filtração da fase móvel podem obstruir os poros internos da coluna cromatográfica, resultando em áreas onde o solvente não consegue penetrar adequadamente;
Uso de solventes incompatíveis na fase móvel: Certas misturas de solventes podem não ser completamente compatíveis com o recheio interno da coluna cromatográfica, levando a obstrução do filme de solvente da fase móvel.
Quais são as consequências do Dewetting em colunas cromatográficas?
Entre algumas consequências do Dewetting, vou citar as que afetam a análise e o equipamento HPLC:
Aumento de pressão da coluna cromatográfica: Estas formações de bolhas ou zonas secas dentro da coluna cromatográfica podem ocasionar obstruções parciais ou totais do fluxo de fase móvel e consequentemente aumentando a pressão da coluna cromatográfica e do sistema HPLC. Muito cuidado com excessos de pressão nos sistemas HPLC, pois podem danificar os selos e pistões das bombas;
Picos fantasmas, picos irregulares ou quebrados no cromatograma: Estas zonas secas podem atrapalhar bastante a análises dos dados cromatográficos, atrapalhando e prejudicando a precisão das análises;
Redução na eficiência da separação analítica: Zonas secas produzem perda de contato entre a fase móvel e a fase estacionária, reduzindo a eficiência de separação dos compostos analisados e resultando em resoluções mais baixas e maior sobreposição de picos cromatográficos;
Reprodutibilidade comprometida: Dewetting pode levar a resultados analíticos inconsistentes entre as corridas analíticas, que compromete a reprodutibilidade do método analítico.
Alguns métodos de mitigação geralmente adotados em desenvolvimento analítico.
Condicionamento da coluna cromatográfica: Já é uma premissa necessária o condicionamento adequado da coluna cromatográfica antes do inicio da corrida cromatográfica. Como uma Boa Prática Analítica, recomenda-se um equilíbrio de condicionamento da coluna cromatográfica com a fase móvel que será utilizada partindo de um fluxo baixo até o fluxo de trabalho do método analítico, salvo quando utiliza-se algum tipo de tampão, que não é recomendado utilizar fluxos baixos de condicionamento e de trabalho;
Controle do fluxo do solvente da fase móvel: Evite mudanças bruscas do fluxo da fase móvel para evitar bolhas e mantenha sempre um fluxo constante;
Uso de solventes apropriados na fase móvel: Sempre selecione solventes que sejam compatíveis entre si. Ajudam na compatibilidade polar e não formam separação de fases do solvente;
Filtragem e purificação dos solventes: Utilização de solventes de grau HPLC e sempre filtrar a fase móvel para remoção de partículas indesejadas. Ao final, desgaseifique;
Monitoramento de pressão: Antes de iniciar a corrida analítica, verifique o delta de variação de pressão do equipamento HPLC, poupará muitos problemas analíticos.
Lembre-se: O Dewetting é um problema técnico e pode comprometer os resultados analíticos!
Comments